Аутостимуляция дермы в лечении выпадения волос и алопеции

Алопеция представляет собой патологическое выпадение волос, вызывающее их редкость или полное отсутствие на определенных участках головы или тела.
В Международной классификации болезней 10-го пересмотра (МКБ-10) заболевания волос классифицированы в диапазоне от L–63 до L–67.
Существующая на данный момент классификация выделяет:
I. Очаговую алопецию
II. Андрогенетическую алопецию
III. Андрогенную алопецию
IV. Диффузную алопецию.
Все эти формы являются нешрамными видами и возникают без предварительного повреждения кожных покровов.
Рубцовая алопеция, напротив, связана с воспалительными процессами, рубцеванием и атрофией кожи головы.
Очаговая форма заболевания стала диагностироваться чаще в последний период времени. Она проявляется участками потери волос и может проявиться на волосистой части головы, бровях, бороде или теле. Основные факторы возникновения очаговой алопеции – это серьезные стрессовые ситуации, инфекции, сопутствующие заболевания желудочно-кишечного тракта, неврологические расстройства и черепно-мозговые травмы.
Андрогенетическая форма облысения является самой распространённой разновидностью потери волос. Это состояние чаще всего наблюдается у мужчин; только около 10% женщин страдает от этого типа облысения. Главная причина такого типа облысения заключается в генетикe: повышена реактивность рецепторов фолликула к действию мужских половых гормонов – андрогенам при нормальном содержании этих самых гормонов в кровотокe. Термин “андрогенетическая” был предложен для использования ещё в 1988 году.
Андрогенный тип облысения отличается от андрогенетического и причислен к другому виду заболевания связанным с потерей волос.

Андрогенная алопеция обусловлена генетическими факторами и влиянием андрогенных гормонов, и этот тип облысения возникает именно из-за гормонального дисбаланса. Женщины сталкиваются с этой проблемой чаще, хотя мужчинам она тоже знакома – соотношение приблизительно 60% против 40%. Диффузное выпадение волос характеризуется равномерной потерей волос по всей поверхности головы. К основным причинам относят стрессовые состояния, диеты, нарушения функций щитовидной железы, ослабление иммунитета, изменения климатических условий и послеродовый период у женщин.

Независимо от причин возникновения алопеции, борьба с ней требует неуклонных усилий и зачастую приносит лишь скромные результаты. В большинстве случаев не удается достигнуть полного восстановления объема и качества волос, особенно это касается мужчин и пожилых людей. Обычно лечение лишь замедляет процесс облысения; процесс утончения волос продолжает свое развитие.

Лечение алопеции является одной из ключевых задач современной медицины, так как количество людей с данной проблемой постоянно растет по статистике ВОЗ. Как инновационный и безопасный метод мы предложить использование инъекций богатой тромбоцитами плазмы (ПРП) под кожу или в кожу. Эту технику мы начали использовать ещё в 2005 году для лечения фотодерматозов кожи.

Значение плазмы, обогащенной тромбоцитами, для восстановления тканей

Необходимость улучшения и ускорения регенерации ран является ключевым элементом при проведении различных операций. В 1980-е годы внимание ученых при изучении заживления ран было сфокусировано на значении кислорода для тканей. Кислород до сих пор играет важную роль в процессе заживления, так как он повышает способность иммунных клеток поглощать микроорганизмы и уничтожать бактерии, а также стимулирует производство коллагена и других белков. Ключевое значение в процессе регенерации тканей также имеет окружающая среда, особенно жидкая фаза - вода.

Открытие того, что тромбоцитарные белки оказывают свое действие на макрофаги через кислород и его напряжение посредством факторов ангиогенеза и других факторов роста, которые способствуют заживлению и предотвращению инфекций, существенно повлияло на понимание значимости этих белков.

Сегодняшние научные работы, связанные с исцелением, сконцентрированы на выявлении факторов роста, участвующих в этом процессе, изучении принципов их работы и определении возможностей их применения для улучшения заживления травм. Изготовление PRP предполагает выделение тромбоцитов с последующей концентрацией и факторов роста в них. Проще говоря, использование PRP направлено на оптимизацию и ускорение процессов заживления благодаря активности факторов роста в тромбоцитах.

Кроме того, PRP отличается способностью модулировать действие первичных факторов роста при наличии вторичных и третичных. Это отличительное свойство плазмы богатой тромбоцитами отделяет её от рекомбинантных факторов роста, каждый из которых специализируется на конкретном типе регенерации.

Основные тромбоцитарные факторы роста (PRP-факторы) — это полипептиды с молекулярной массой 5–50 кДа. Они объединены в одну группу как трофические регуляторные элементы. Подобно гормонам, они обладают широким спектром действий на различные клетки: стимулируют или подавляют митогенез, хемотаксис и дифференциацию клеток.

В отличие от гормонов, которые обычно вырабатываются специализированными клетками, факторы роста производятся различными типами клеток, распространенными по всему организму и действуют на эндокринном, паракринном и аутокринном уровнях. Среди наиболее значимых факторов роста выделяют тромбоцитарный фактор роста (PDGF–aa, PDGF–bb, PDGF–ab), трансформирующий фактор роста (TGF–β1, TGF–β2), сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), эпидермальный фактор роста (EGF), фибробластный фактор роста (FGF) и инсулиноподобные факторы роста (IGF).

Эти природные вещества обладают биологически определенной пропорциональностью и отличны от плазмы богатой тромбоцитами из-за этого соотношения. В свою очередь, рекомбинантные виды данных веществ получены из культур яйцеклеток китайского хомяка с помощью бактериального векторной техники для введения человеческих генов. Это приводит к созданию однотипного продукта без использования каких-либо носителей. В начале активации тромбоциты быстро освобождают до 70% содержания своих факторов за первые 10 минут. Полное высвобождение происходит за час. Затем они продолжительное время - до 8 дней - формируют дополнительные количества данных компонентов перед тем как погибнуть.

Тромбоцитарный фактор роста (PDGF) является наиболее изученным элементом в категории белков, стимулирующих рост и деление клеток. Несмотря на обширный объем информации, который был собран с момента его открытия, все еще нет окончательной теории, которая могла бы полностью объяснить его функции в организме. Следственно, продолжающиеся исследования неизменно приносят новые открытия.

Человеческий PDGF, выделенный из тромбоцитов, состоит из гетеродимера — двух разных цепей A и B соединены дисульфидными связями. Хотя встречаются гомодимерные формы PDGF как минорные компоненты сыворотки крови, гетеродимер AB представляет основную форму у человека. Уровень PDGF в крови поддерживается на стабильной отметке 50–60 нг/мл; при этом его нет в плазме без тромбоцитов. Используя меченый белок для экспериментов, было установлено что он имеет относительно короткое время жизни в сыворотке: полураспад составляет около двух минут. Предположительно стабильная концентрация обеспечивается за счет непрекращаемого процесса выделения белка тромбоцитами. PDGF играет ключевую роль в привлечении лейкоцитов, гранулоцитов и макрофагов через процесс хемотаксиса; для стимуляции направленного перемещения этих клеток достаточна всего лишь концентрация PDGF равная 1–2 нг/мл.

В этом процессе начинают активно участвовать клетки соединительной ткани, которые играют ключевую роль в формировании рубцовой ткани: они стимулируют размножение фибробластов, их целенаправленное перемещение, а также производство и выделение белков экстрацеллюлярного матрикса. Семейство трансформирующих ростовых факторов (TGF) объединяет более 40 разнообразных представителей, распределенных по нескольким подгруппам. К этому же семейству относятся активины, ингибины и другие типы цитокинов.

TGF-β является одним из основных стимуляторов производства коллагена. TGF-α способствует активации фибробластов, развитию эндотелиальных клеток и работает как ангиогенный агент. Подобно эпидермальному фактору роста, TGF-α влияет на контроль за пролиферацией клеток.

Теоретические аспекты морфологических и биохимических изменений

Тромбоциты инициируют естественные процессы самоисцеления, регенерации и восстановления, стимулируя рост и размножение новых здоровых клеток. Когда тромбоциты активируются, они меняют свою дискообразную форму на сферическую, образуют псевдоподии (выросты), прилипают к подэндотелиальным структурам, особенно к коллагену. Активация тромбоцитов также приводит к их первичной агрегации и выделению различных веществ, которые являются мощными активаторами тромбоцитов (ADP, серотонин, адреналин, нестабильные простагландины, тромбоксан A2 и тромбоцитактивирующий фактор).

В лабиринтах рыхлой соединительной ткани постоянно пребывают клетки-потомки кроветворной стволовой клетки. Среди них – гистиоциты-макрофаги, клетки представляющие антигены; тканевые базофилы или мастоциты; плазматические клетки; а также различные субтипы кровяных клеток: гранулоциты монолимфартерии. Гистиоктобы-макрогале составлять от 10 до 20 процентов всех клеточных элементов в составе рыхлой соединительной ткани.

Специфический тип макрофагов выполняет функции антигенпрезентирующих клеток, что позволяет им участвовать во взаимодействии Т- и В-лимфоцитов в процессе иммунной реакции на инородные агенты. Макрофаги обладают способностью нейтрализации токсинов и аккумуляции жизненно важных красителей после их введения в кровоток. Они демонстрируют антибактериальную активность за счет выделения лизоцима, кислых гидролаз, лактоферрина и других элементов, а также противоопухолевую активность благодаря продукции фактора некроза опухолей. Макрофагальные факторы роста стимулируют пролиферацию эпителиальных клеток, развитие и дифференцировку фибробластов, формирование новых сосудов и другие процессы.
Фагоцитоз — это основная биологическая функция множества тканевых клеток. Однако только те из них, которые способны захватывать бактерии, чужеродные частицы, токсины и другие элементы для последующего ферментативного разложения в цитоплазме должны быть отнесены к макрофагной системе организма.

Тканевые мастоциты, известные также как базофилы, лаброциты или гепариноциты, происходят от стволовых клеток кроветворения. Основной особенностью этих клеток является наличие в их цитоплазме обильных гранул размером от 0,3 до 0,7 мкм. Эти гранулы способны к метахромазии – изменению цвета не на тот, что применён в красителе. Внутри этих частиц содержатся вещества как гепарин и гистамин, а также хондроитинсульфаты, серотонин и гиалуроновая кислота. Также присутствуют факторы хемотаксиса для эозинофилов и нейтрофилов среди других компонентов.

Когда происходит дегрануляция тучных клеток - выброс содержимого гранул - высвобождается гепарин, который препятствует коагуляции крови. Выделение биогенных аминов вызывает изменения в проницаемости барьера между кровью и тканями. Помимо этого мастоциты активно участвуют в иммунном ответе за счёт выработки различных цитокинов.

Материалы и методы

В период с 2006 по 2010 годы была осуществлена терапия у 280 больных, страдающих от алопеции, из которых 210 (75%) составляли женщины и 70 (25%) мужчины, с возрастным диапазоном от 15 до 72 лет. Исключение участников из исследования происходило по следующим критериям: системные кровные заболевания; аллергические реакции на препараты, предотвращающие свёртывание крови; наличие раковых опухолей; диабет; обострения дерматоза и другие обострения хронических заболеваний. У каждого пациента проводился сбор анамнеза, общий клинический анализ крови и коагулограмма для определения содержания фибриногена, а также биохимический анализ крови.

Использование центрифугирования для получения богатой тромбоцитами плазмы (БоТП) осуществлялось с помощью аппарата EBA 20, произведенного компанией Andreas Hettich GmbH & Co. из Германии, имеющего сертификат соответствия ФС №2009/04309. Для максимальной сохранности клеток крови взятие образца проводилось через венозный катетер с диаметром не менее 19G. Кровь размещалась в пробирки для одноразового использования с антикоагулянтом, признанные и сертифицированные на территории РФ.

Объем отобранной крови составлял 36 мл, что равняется четырем пробиркам vacuette по 9 мл каждая. Затем они помещались в центрифугу для разделения на составные части в зависимости от их плотности: сначала выделяется плазма с низким содержанием тромбоцитов (БеТП), за ней — слой богатый тромбоцитами и лейкоцитами (иногда его называют “тромбоцитарно-лейкоцитарным”), и последним отделяются эритроциты — самые тяжелые элементы крови. БоТП является плазмой, обогащенной тромбоцитами и лейкоцитами, объем этой фракции примерно равен 6 мл.

И богатая, и бедная тромбоцитами плазма являются фракциями крови и
содержат большое количество фибриногена и других факторов свертывания.
Плазма, богатая тромбоцитами, извлекается при помощи шприца, а остальные кровяные фракции утилизируются в соответствии с гигиеническими стандартами Российской Федерации. Инъекционное использование БоТП было начато в 2005 году. Концепция инъекций БоТП позволила вернуться к методам инфильтрации тканей с использованием компонентов крови на более безопасном и менее болезненном уровне. Увеличение объема инфильтрата позволяет регулировать концентрацию тромбоцитов. Для лечения выпадения волос БоТП вводится прямо в кожу головы без предварительного запуска свертывания крови – по 0.5 мл на каждые 2 см² поверхности – используя стерильный шприц после очистки антисептиком на водной основе и мезотерапевтический метод инъекций.

Однако при проведении процедур может возникать аллергическая реакция как возможное осложнение, которую можно эффективно устранить по протоколу лечения немедленных аллергических реакций под контролем медучреждения. Обычно для достижения желаемого результата проводят от четырех до пяти процедур через интервалы от 7 до 10 дней между ними и делают перерыв длиной полгода между сериями таких процессов.

Результаты и их обсуждение

После проведения одного или двух курсов обработки оценили эффективность терапии для случаев, когда наблюдалось интенсивное теряние волос. Остановка процесса выпадения волос замечается начиная с пятого-шестого дня лечения и продолжительность положительного результата может длиться от шести до восьми месяцев. К окончанию курса наблюдается рост новых волос, их укрепление и приобретение блеска. Эти данные подкреплены исследованиями, связанными с плотностью и толщиной волосяных стержней.

В результате, происходит не только прекращение выпадения волос, но также нормализация клеточного метаболизма, повышение кровообращения и улучшение питания фолликулов. Параллельно увеличивается количество коллагеновых и эластичных волокон, что способствует сохранению эластичности кожи головы и стимулирует рост новых волос.

Исследования показали, что применение инъекций БоТП для стимуляции роста волос на голове значительно повышает активность роста волос и способствует улучшению их состояния - появляется здоровый блеск.

Исследование морфологических характеристик биоптата кожи у кроликов было проведено на основе использования кожи представителей породы “Советская Шиншилла” в качестве экспериментальной модели. В течение эксперимента были изучены 25 особей. Лечение проводилось с обеих сторон: применялись бритье и обработка, при этом в одну сторону вводилась БоТП, а другая сторона оставалась без введения каких-либо веществ.
На седьмой день после начала эксперимента производили биопсии кожи.

Гистологический анализ показал отсутствие явных признаков интенсивного воспаления после инъекций БоТП. Наблюдаемое незначительное увеличение количества клеток в сосочковом слое дермы возле волосяных фолликулов может быть связано со следами механического повреждения от иглы, использовавшейся для инъекции. В глубоких слоях дермы – ретикулярном слое – зафиксированы увеличенные фибробласты веретенообразной формы и гистиоциты с большими округлой формы ядрами, то есть макрофагами соединительной ткани.
Капилляры выглядят нормальными и не показывают признаков функциональных или структурных нарушений.

Выводы исследования

Аутостимуляция тканей способствует активной регенерации, что может быть эффективным для лечения состояний, связанных с ускоренным выпадением волос.
Использование БоТП через инъекции является удобным и минимально травмирующим методом.
Стимуляция роста волос на голове посредством инъекций БоТП приводит к ускорению их роста и улучшению общего состояния волос.